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什么是pfu扩增

酶切位点是你切过之后才是粘性末端 Pfu扩增出来是平末端 所以没法连普通的T载体 不过也有平末端链接的T载体

考虑这两个酶,是打算扩增平末端的片段吧?100 bp的话,用不着KOD,就用普通的Pfu就行了,因为片段很短,突变的几率非常小,因此不需要保真性那么高的酶,像100 bp的片段,什么酶都能扩增的很好的。KOD毕竟贵一些,主要是没有这个必要哈。

pfu dna polymerase是目前已知dna合成准确性最高的酶。在正常的pcr扩增程序下,其扩增产物的错误率为4000bp中发生一个。错误率仅为taq dna polymerase的1∕7--1∕10。pfu dna polymerase的耐高温性亦优于taq dna polymerase,变性温度可高至98℃(...

3100bp不算长,而且还是质粒模板,常规的就能扩增出来。 主要还是要注意引物的设计,其Tm值和GC含量,还有就是该片段的GC含量,如果太高可以加点DMSO。 剩下的关于酶之类的条件一般说明书上都有,仔细看看。

可以尝试Roche的长片断扩增pfu酶,当然可能会稍微贵点.一般的酶可能扩不了这么长. 我还有个方法就是,你的目的片断中找一个单酶切的位点把目的片断分为两段扩增,再分两次连到载体中,这样会好扩增得.

常见的高保真酶有Pfu,Pfu Ultra,但是我用过最好用的高保真酶是Phusion. 因为一般的高保真酶因为有外切酶的活性,虽然提高了保真度,但是扩增效率会降低,所以...

按照公司protocal来做……

第一天 17:00:后用接种环取一单克隆细菌接种于LB培养液中,37°C摇床过夜(不要超过16小时) 第二天 7:30:打开紫外灯,照射半小时(将器械放入通风橱中);8:00:将20mL的LB培养液放入250mL的三角烧瓶中,按1:100的比例稀释过夜培养的细(...

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