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什么是pfu扩增

酶切位点是你切过之后才是粘性末端 Pfu扩增出来是平末端 所以没法连普通的T载体 不过也有平末端链接的T载体

考虑这两个酶,是打算扩增平末端的片段吧?100 bp的话,用不着KOD,就用普通的Pfu就行了,因为片段很短,突变的几率非常小,因此不需要保真性那么高的酶,像100 bp的片段,什么酶都能扩增的很好的。KOD毕竟贵一些,主要是没有这个必要哈。

常见的高保真酶有Pfu,Pfu Ultra,但是我用过最好用的高保真酶是Phusion. 因为一般的高保真酶因为有外切酶的活性,虽然提高了保真度,但是扩增效率会降低,所以...

3100bp不算长,而且还是质粒模板,常规的就能扩增出来。 主要还是要注意引物的设计,其Tm值和GC含量,还有就是该片段的GC含量,如果太高可以加点DMSO。 剩下的关于酶之类的条件一般说明书上都有,仔细看看。

说明第一次的扩增产物就是非特异性条带 回收之后再做模板肯定出不来

这得看你PCR扩增的时候用的是什么酶,一般rTaq酶扩增出来的片段都是粘性末端。但高保真Taq酶可以扩出平末端。 你可以问卖试剂的人具体的rTaq酶名称。

聚合酶链式反应简称PCR(英文全称:Polymerase Chain Reaction),是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物延伸”三步反应的多...

Pfu是DNA扩增过程中,保真性最高,出错率最低的高温DNA聚合酶。基因片段用Pfu扩增得到的产物为平末端,直接克隆比较困难。 DNA PCR扩增 : 用Pfu进行高保真PCR扩增,50ul反应体积,一般扩增25-30个循环, 2.5 U Pfu DNA Polymerae。

可以尝试Roche的长片断扩增pfu酶,当然可能会稍微贵点.一般的酶可能扩不了这么长. 我还有个方法就是,你的目的片断中找一个单酶切的位点把目的片断分为两段扩增,再分两次连到载体中,这样会好扩增得.

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