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什么是pfu扩增

Pfu是DNA扩增过程中,保真性最高,出错率最低的高温DNA聚合酶。基因片段用Pfu扩增得到的产物为平末端,直接克隆比较困难。 DNA PCR扩增 : 用Pfu进行高保真PCR扩增,50ul反应体积,一般扩增25-30个循环, 2.5 U Pfu DNA Polymerae。Pfu DNA聚合酶...

酶切位点是你切过之后才是粘性末端 Pfu扩增出来是平末端 所以没法连普通的T载体 不过也有平末端链接的T载体

考虑这两个酶,是打算扩增平末端的片段吧?100 bp的话,用不着KOD,就用普通的Pfu就行了,因为片段很短,突变的几率非常小,因此不需要保真性那么高的酶,像100 bp的片段,什么酶都能扩增的很好的。KOD毕竟贵一些,主要是没有这个必要哈。

3100bp不算长,而且还是质粒模板,常规的就能扩增出来。 主要还是要注意引物的设计,其Tm值和GC含量,还有就是该片段的GC含量,如果太高可以加点DMSO。 剩下的关于酶之类的条件一般说明书上都有,仔细看看。

Pfu是DNA扩增过程中,保真性最高,出错率最低的高温DNA聚合酶。基因片段用Pfu扩增得到的产物为平末端,直接克隆比较困难。 DNA PCR扩增 : 用Pfu进行高保真PCR扩增,50ul反应体积,一般扩增25-30个循环, 2.5 U Pfu DNA Polymerae。

第一天 17:00:后用接种环取一单克隆细菌接种于LB培养液中,37°C摇床过夜(不要超过16小时) 第二天 7:30:打开紫外灯,照射半小时(将器械放入通风橱中);8:00:将20mL的LB培养液放入250mL的三角烧瓶中,按1:100的比例稀释过夜培养的细(...

简单模板扩增速度15s/kb 复杂模板扩增速度30s/kb

按照常规PCR方法进行各目的片段的独立扩增。扩增使用PfuDNAPolymerase,各片段扩增的反应条件及扩增产物长度如表2所示。扩增产物用0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测,...

PCR MasterMix包含三种酶(Taq,Pfu,Taq plus),每种酶对应着两种PCR MasterMix(含染料和不含染料),一共六种PCR MasterMix。 Taq:扩增效率最高的耐热...

按照常规PCR方法进行各目的片段的独立扩增。扩增使用PfuDNAPolymerase,各片段扩增的反应条件及扩增产物长度如表2所示。扩增产物用0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测,...

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